在藥品純度檢測(cè)、食品安全性分析、環(huán)境污染物篩查等關(guān)鍵領(lǐng)域，液相色譜儀（HPLC）就像一位精準(zhǔn)的 “化驗(yàn)師”，用科學(xué)的力量守護(hù)著我們生活的方方面面?？蛇@位 “化驗(yàn)師” 要想始終保持精準(zhǔn)，在新 “上崗”、經(jīng)歷大修或更換 “工作場(chǎng)地” 后，都得經(jīng)過(guò)一套全面的 “能力考核”—— 也就是儀器驗(yàn)證。今天，我們就來(lái)詳細(xì)拆解這套驗(yàn)證方案，讓每一個(gè)環(huán)節(jié)都清晰可感。?

一、驗(yàn)證目的與原則?

咱們做驗(yàn)證，核心就是要拿出實(shí)實(shí)在在的書(shū)面證據(jù)，證明這臺(tái)液相色譜儀能一直穩(wěn)定工作，既符合預(yù)設(shè)的性能標(biāo)準(zhǔn)，又能滿足分析方法的要求，終讓每一組測(cè)試數(shù)據(jù)都經(jīng)得起檢驗(yàn)，既準(zhǔn)確又可靠。而且，這套 “考核” 得趕在儀器正式投入樣品檢測(cè)前完成，這就是我們常說(shuō)的前瞻性驗(yàn)證原則，確保儀器 “上崗” 前就具備合格的 “業(yè)務(wù)能力”。?

液相色譜儀驗(yàn)證流程圖

二、驗(yàn)證生命周期流程?

完整的儀器驗(yàn)證，就像一場(chǎng)貫穿 “職業(yè)生涯” 的系統(tǒng)管理，主要分為四個(gè)關(guān)鍵階段：設(shè)計(jì)確認(rèn)（DQ）、安裝確認(rèn)（IQ）、運(yùn)行確認(rèn)（OQ）和性能確認(rèn)（PQ），每一步都缺一不可。?

第一階段：設(shè)計(jì)確認(rèn) (DQ)?

目的?

在采購(gòu)儀器前，我們得先確認(rèn)這臺(tái)儀器的設(shè)計(jì)規(guī)格，是不是剛好符合實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際需求、要完成的分析任務(wù)，以及相關(guān)法規(guī)的要求，避免買錯(cuò) “工具”。?

流程?

先想清楚實(shí)驗(yàn)室要做哪些分析工作，比如檢測(cè)藥品里的有效成分含量、排查食品中的有害雜質(zhì)，還是監(jiān)測(cè)環(huán)境中的基因毒性物質(zhì)。根據(jù)這些任務(wù)，明確寫(xiě)出我們對(duì)儀器的 “需求清單”（用戶需求說(shuō)明 URS），包括儀器得有怎樣的性能、需要搭配哪些配件、操作軟件是否符合 21 CFR Part 11 法規(guī)要求，還有供應(yīng)商能提供哪些售后支持等。?

拿著這份 “需求清單”，對(duì)比不同廠家的儀器說(shuō)明書(shū)，一一核對(duì)，看哪家的儀器能全面滿足我們的要求。?

后整理出一份設(shè)計(jì)確認(rèn)報(bào)告（DQ 報(bào)告），清晰說(shuō)明為什么選這款儀器，證明選型的合理性。?

注意?

如果是采購(gòu)市面上的標(biāo)準(zhǔn)商用儀器，設(shè)計(jì)確認(rèn)通常由我們自己完成，但廠家提供的儀器規(guī)格書(shū)是非常重要的參考依據(jù)，可不能忽視。?

第二階段：安裝確認(rèn) (IQ)?

目的?

儀器到貨后，得仔細(xì)檢查它的 “身體部件”（硬件）、“大腦系統(tǒng)”（軟件），還有安裝的 “工作環(huán)境”，確保都符合當(dāng)初的設(shè)計(jì)要求和廠家的規(guī)范，為后續(xù)運(yùn)行打好基礎(chǔ)。?

流程?

到貨檢查：對(duì)照裝箱單，逐一核對(duì)儀器的所有部件，比如主機(jī)、檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、工作站，還有備用零件和耗材等，既要確認(rèn)數(shù)量齊全，也要檢查有沒(méi)有在運(yùn)輸過(guò)程中出現(xiàn)損壞。?

安裝環(huán)境檢查：看看實(shí)驗(yàn)室的空間夠不夠放儀器、臺(tái)面能不能承受儀器重量、電源電壓和接地是否符合要求、溫度濕度是否適宜，還要避免儀器被陽(yáng)光直射或受到振動(dòng)干擾，給儀器找個(gè) “舒服” 的工作環(huán)境。?

硬件安裝：讓專業(yè)工程師按照說(shuō)明書(shū)，把各個(gè)模塊連接安裝好，仔細(xì)檢查管路連接是否正確、牢固，防止后續(xù)出現(xiàn)漏液等問(wèn)題。?

軟件安裝：安裝好工作站軟件后，確認(rèn)軟件的版本號(hào)、授權(quán)許可是否有效，同時(shí)記錄好計(jì)算機(jī)的系統(tǒng)信息，保證軟件能正常運(yùn)行。?

文檔移交：把儀器附帶的所有資料收集歸檔，比如操作手冊(cè)、維修手冊(cè)、電路圖、軟件備份光盤、合格證等，這些都是后續(xù)維護(hù)和追溯的重要依據(jù)。?

整理出安裝確認(rèn)報(bào)告（IQ 報(bào)告），把所有檢查結(jié)果詳細(xì)記錄下來(lái)，確保每一步都有跡可循。?

第三階段：運(yùn)行確認(rèn) (OQ)?

目的?

儀器安裝好后，不能直接 “上崗”，還得通過(guò)實(shí)際運(yùn)行測(cè)試，看看它的各項(xiàng)功能和關(guān)鍵運(yùn)行參數(shù)，是不是都能達(dá)到廠家承諾的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，確認(rèn)它具備 “干活” 的基本能力。?

流程（使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或?qū)φ掌愤M(jìn)行測(cè)試）?

泵系統(tǒng)驗(yàn)證?

流速準(zhǔn)確性：設(shè)定不同的流速（比如 0.5 mL/min、1.0 mL/min、2.0 mL/min），用稱重的方法測(cè)量實(shí)際流出液體的重量，計(jì)算實(shí)際流速和設(shè)定流速的偏差，這個(gè)偏差得小于 ±1% 才合格。?

流速精密度：固定一個(gè)流速，多次測(cè)量流出液體的重量，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），RSD 要小于 0.1%，說(shuō)明流速穩(wěn)定。?

壓力脈動(dòng)測(cè)試：觀察儀器運(yùn)行時(shí)的壓力波動(dòng)情況，壓力越平穩(wěn)，說(shuō)明泵系統(tǒng)的穩(wěn)定性越好。?

自動(dòng)進(jìn)樣器驗(yàn)證?

進(jìn)樣準(zhǔn)確性：往儀器里注入已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，通過(guò)檢測(cè)結(jié)果計(jì)算回收率，回收率在 100%±2% 范圍內(nèi)，說(shuō)明進(jìn)樣準(zhǔn)確。?

進(jìn)樣精密度：連續(xù) 6 次注入同一份標(biāo)準(zhǔn)溶液，計(jì)算色譜峰面積或保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），RSD 小于 1.0%，代表進(jìn)樣精度達(dá)標(biāo)。?

柱溫箱驗(yàn)證?

溫度準(zhǔn)確性與穩(wěn)定性：把經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)的精密溫度探頭放進(jìn)柱溫箱，設(shè)定不同的溫度（比如 25°C、40°C），實(shí)時(shí)監(jiān)控實(shí)際溫度和設(shè)定溫度的偏差，偏差要小于 ±2°C，同時(shí)觀察溫度的波動(dòng)范圍，確保溫度穩(wěn)定。?

檢測(cè)器驗(yàn)證（以常用的 UV/VIS 檢測(cè)器為例）?

波長(zhǎng)準(zhǔn)確性：用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（比如氧化鈥濾光片）掃描特征吸收峰，對(duì)比實(shí)際檢測(cè)到的波長(zhǎng)和標(biāo)準(zhǔn)波長(zhǎng)，偏差小于 ±1 nm 才算合格。?

基線噪聲與漂移：在指定的測(cè)試條件下讓儀器運(yùn)行基線，基線越平穩(wěn)、漂移越小，說(shuō)明檢測(cè)器的穩(wěn)定性越好。?

線性范圍：準(zhǔn)備一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別注入儀器，以濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)做線性回歸，相關(guān)系數(shù) R2 要大于 0.999，證明檢測(cè)器在這個(gè)濃度范圍內(nèi)能準(zhǔn)確響應(yīng)。?

系統(tǒng)整體性能驗(yàn)證：通常通過(guò)色譜柱效（理論塔板數(shù)）和拖尾因子來(lái)判斷。按照藥典等標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的測(cè)試條件注入標(biāo)準(zhǔn)溶液，計(jì)算特定色譜峰的柱效（一般要求高于規(guī)定的理論值）和拖尾因子（通常在 0.8-1.5 之間），確保整個(gè)系統(tǒng)運(yùn)行正常。?

第四階段：性能確認(rèn) (PQ)?

目的?

經(jīng)過(guò)前面的 “考核”，儀器已經(jīng)具備基本能力，但還得看看它在實(shí)際工作場(chǎng)景中，用正式的分析方法和系統(tǒng)條件檢測(cè)樣品時(shí)，能不能持續(xù)給出可靠、可重復(fù)的結(jié)果，這是儀器 “上崗” 前的后一道檢驗(yàn)。?

流程?

模擬平時(shí)的檢測(cè)過(guò)程，用要分析產(chǎn)品的正式分析方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)來(lái)操作。?

配制好系統(tǒng)適用性溶液和樣品溶液，連續(xù)進(jìn)行進(jìn)樣測(cè)試。?

檢查系統(tǒng)適用性的各項(xiàng)指標(biāo)，比如分離度（Rs）、理論塔板數(shù)（N）、拖尾因子（T）、重復(fù)性（RSD）等，只有所有指標(biāo)都符合分析方法的規(guī)定，才算通過(guò)性能確認(rèn)。?

特別要注意的是，性能確認(rèn)不是一次就結(jié)束的，每次使用分析方法檢測(cè)樣品前，都得通過(guò)系統(tǒng)適用性測(cè)試，持續(xù)證明儀器的性能沒(méi)問(wèn)題。

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表格 1：液相色譜儀驗(yàn)證四階段核心要素表

表格 2：液相色譜儀關(guān)鍵驗(yàn)證參數(shù)及合格標(biāo)準(zhǔn)表

三、驗(yàn)證周期與再驗(yàn)證?

首次驗(yàn)證：新買的儀器、經(jīng)過(guò)大修的儀器，或者從一個(gè)地方搬到另一個(gè)地方的儀器，都必須完成全套驗(yàn)證（包括 IQ、OQ、PQ），確保 “初始狀態(tài)” 合格。?

定期再驗(yàn)證：根據(jù)儀器的使用頻率和平時(shí)的性能表現(xiàn)，一般每年要對(duì)關(guān)鍵性能進(jìn)行一次再驗(yàn)證，主要是重復(fù) OQ 中的部分關(guān)鍵項(xiàng)目，及時(shí)發(fā)現(xiàn)潛在問(wèn)題。?

異常情況再驗(yàn)證：如果儀器出現(xiàn)嚴(yán)重故障并維修，或者更換了泵、檢測(cè)器燈、氘燈等關(guān)鍵部件，就得針對(duì)這些變化進(jìn)行針對(duì)性的再驗(yàn)證，確保儀器性能恢復(fù)正常。

表格 3：液相色譜儀再驗(yàn)證類型及觸發(fā)條件表